The Gram Stain
革蘭氏染色是一種鑑別染色技術,將細菌分為兩組:革蘭氏陽性(染成紫色/藍色)和革蘭氏陰性(染成粉紅色/紅色)。此分類基於細胞壁結構的差異,有助於在培養結果出來前指導初始抗生素的選擇。
準備乾淨的載玻片
準備革蘭氏染色四種試劑:結晶紫(初染)、碘液(媒染)、脫色劑(酒精/丙酮)、番紅(複染)
準備本生燈或載玻片加熱器
準備蒸餾水沖洗用
準備拭鏡紙和浸油(油鏡觀察用)
製備塗片:取少量樣本薄塗在載玻片上,風乾
加熱固定:將載玻片快速通過火焰2-3次(塗片面朝上)
滴加結晶紫覆蓋塗片,靜置1分鐘
用蒸餾水輕柔沖洗
滴加碘液覆蓋塗片,靜置1分鐘
用蒸餾水輕柔沖洗
傾斜載玻片,滴加脫色劑直到流出液變清澈(通常5-10秒)——此步驟最關鍵
立即用蒸餾水沖洗停止脫色
滴加番紅覆蓋塗片,靜置30秒至1分鐘
用蒸餾水沖洗
風乾或用吸水紙輕輕吸乾
在100x油鏡下觀察——革蘭氏陽性菌呈紫色,革蘭氏陰性菌呈粉紅色
記錄觀察結果:細菌形態(球菌/桿菌)、染色特性(陽性/陰性)、排列方式
將結果報告給獸醫師
保存染色片供複查
清潔染色區域,處理化學廢液
能正確執行革蘭氏染色四步驟
通過標準:每步驟時間正確,特別是脫色步驟不過度或不足
能正確辨識革蘭氏陽性和陰性菌
通過標準:在油鏡下正確區分紫色(陽性)和粉紅色(陰性)細菌
能描述細菌形態
通過標準:能區分球菌、桿菌和常見排列方式(鏈、葡萄串等)