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適應症 (Indications)
- 血液抹片檢查是基本的診斷工具，即使在有自動分析儀可用的情況下，仍然是小動物醫學正確實踐中不可或缺的一環。 適應症包括：
- 全血球計數 (CBC) 的一部分 — 用於紅血球、白血球及血小板的形態學評估
- 貧血評估 — 用於鑑定紅血球形態（大小、形狀、顏色、內含物）
- 疑似血液寄生蟲 — 用於辨識血源性寄生蟲（如 Babesia、Haemobartonella/Mycoplasma、Ehrlichia、Anaplasma）
- 血小板估算 — 用於驗證自動計數結果並評估血小板形態
- 白血球分類計數 — 用於確認自動分類結果並辨識異常細胞
- 疑似白血病或淋巴瘤 — 用於辨識腫瘤細胞
- 嗜中性球毒性變化的評估
- 網狀紅血球計數的評估（配合適當染色）
- 隨 EDTA 樣本一同送檢 — 以區分真正的體內變化與樣本老化所產生的人為假象
禁忌症 (Contraindications)
- 製作血液抹片並無絕對禁忌症。
- 注意：血液抹片應在採血後盡快使用新鮮血液製作。延遲製作抹片可能導致細胞形態出現人為變化。
- 長時間保存的 EDTA 樣本不應用於確定性形態學評估，除非同時有新鮮抹片作為對照。
設備 (Equipment)
- 乾淨、無油脂的玻璃載玻片（每個樣本至少 3–4 片）
- 新鮮 EDTA 抗凝血液樣本（或直接從針頭座取得的新鮮全血）
- 推片用載玻片（邊緣光滑、無缺口的乾淨載玻片）
- Romanowsky 型染色液：Diff-Quik、modified Wright's、Giemsa 或 Leishman's 染色液
- 染色架
- 蒸餾水或緩衝溶液（用於沖洗）
- 浸油（用於 100x 檢查）
- 光學顯微鏡，配備 10x、40x 及 100x 油浸物鏡
- 選用：22% 牛白蛋白（bovine albumin）（用於爬蟲類或禽類血液抹片以保護脆弱細胞）
患者準備 (Patient Preparation)
- 1使用正確的靜脈穿刺技術將血液樣本採集至 EDTA 抗凝管（紫頭管）。
- 2理想情況下，在採血時立即使用針頭座中的新鮮血液製作血液抹片 — 這可提供最佳的細胞形態。
- 3若使用 EDTA 血液，應盡快製作抹片。製作前輕柔地將試管上下翻轉數次以混合均勻。
- 4若同時需要凝血樣本，將 EDTA 血液直立放置，以防止細胞黏附於橡膠塞上，避免離心時發生溶血。
- 5在將血液轉移至採集管之前先取下針頭，以減少溶血的發生。
技術 (Technique)
- 楔形（推片）技術 — 最常用的方法： 1. 將少量（約 2–3 mm 直徑）混合均勻的血液滴於乾淨玻璃載玻片的一端附近。 2. 將第二片載玻片（推片）以約 30–45 度角放在第一片載玻片上。 3. 將推片向後拉，直到接觸血滴。 4. 利用毛細作用讓血液沿推片的接觸邊緣擴散。 5. 以平穩、快速的動作將推片沿載玻片長度方向向前推送。 6. 製成的抹片應具有羽毛狀邊緣（feathered edge）、本體區（body）和厚實區域。 7. 讓抹片快速自然風乾 — 不要對其吹氣或使用加熱固定。 最佳抹片品質的技巧：
- 較大的血滴或較陡的推片角度會產生較厚的抹片。
- 較小的血滴或較淺的角度會產生較薄的抹片。
- 貧血的血液會擴散得更遠；需相應調整角度。
- 爬蟲類或禽類血液：在塗抹前，將 5 滴血液與 1 滴 22% 牛白蛋白混合，以保護脆弱的有核細胞。
步驟 (Procedure Steps)
- 1在載玻片上標記病患識別資訊（使用鉛筆在磨砂端書寫）。
- 2在載玻片一端放置少量新鮮、混合均勻的血液。
- 3使用推片以 30–45 度角向後拉至接觸血滴。
- 4讓血液沿接觸邊緣擴散。
- 5平穩且快速地將推片向前推送以製作抹片。
- 6立即讓抹片自然風乾 — 快速乾燥可保持細胞形態。
- 7以肉眼觀察抹片 — 應具有羽毛狀邊緣、過渡區和厚實區。理想的檢查區域位於羽毛狀邊緣前方的單層區。
- 8使用 Romanowsky 染色液（如 Diff-Quik）進行染色： a. 將載玻片浸入甲醇固定液（或第一瓶 Diff-Quik 溶液）中浸泡 5–10 次。 b. 浸入嗜伊紅染料（第二瓶溶液）5–10 次。 c. 浸入嗜鹼性染料（第三瓶溶液）5–10 次。 d. 用蒸餾水輕柔沖洗。 e. 自然風乾。
- 9在光學顯微鏡下檢查： a. 10x：掃描整體品質、大型細胞團塊、寄生蟲。 b. 40x：評估細胞分布，估算白血球計數。 c. 100x（油浸）：進行分類計數（100–200 個細胞）、評估紅血球及白血球形態、估算血小板計數、搜尋血液寄生蟲。
- 10保留 1–2 片未染色的載玻片，以備日後可能需要的特殊染色。
術後護理 (Aftercare)
- 將已染色的載玻片存放於避光防塵的載玻片盒中。
- 將抹片連同 EDTA 樣本一起送至實驗室進行比對。
- 自然風乾、未固定的抹片可在無需特殊預防措施的情況下寄送。
- 記錄結果並與自動血液分析儀的數據進行對照比較。
- 染色必須保持一致 — 形態學發現的判讀取決於以相同方式染色的大量抹片的檢查。
- 若使用自動染色，需確保血液抹片製作良好且均質。
併發症 (Complications)
- 抹片品質不佳 — 因操作技術不當導致過厚、過薄或分布不均
- 因 EDTA 血液延遲製作抹片而產生的人為細胞變化 — 皺縮、腫脹、脫顆粒
- 因粗暴處理血液樣本或使用小口徑針頭導致溶血
- 染色人為誤差 — 染色技術不一致、試劑過期或染色液受污染
- 凝血樣本導致抹片無法判讀 — 需確保適當的抗凝及混合
- 血小板團塊集中在羽毛狀邊緣而遺失 — 檢查時務必掃描羽毛狀邊緣以尋找血小板聚集
- 將人為假象誤判為病理發現 — 應結合臨床病史進行對照，若有疑問則重複檢查
